基因過表達


根據基因整合位點的確定性,可分為:



定點條件性基因過表達

Rosa26位點是目前最為常用的定點整合位點之一。它位於小鼠6號染色體,是一個非編碼基因,已被證明在大部分組織和細胞中都有表達。表達比較活躍的基因區域因為需要轉錄因子的進入基因組結構不會被異染色質化,因此在這個區域定點插入外源DNA,在各組織中表達的可能性都非常高。所以,Rosa26被廣泛用來作為外源基因表達的安全位點。


利用Cre-LoxP系統對目的基因進行可誘導表達調控。構建Rosa26-(SA/pCAG)-loxp-Stop-loxp-cDNA-pA 重組載體,將條件性過表達結構插入到Rosa26基因intron1中。該類型Knockin小鼠可與各類表達Cre重組酶的工具鼠雜交,獲得組織特異性表達外源基因的條件性過表達小鼠模型。


  • 可避免隨機整合轉基因模型中多拷貝數、多位點插入、表達不穩定、需要建系等煩惱

  • 可實現外源基因穩定的可調控表達,避免全身性基因過表達可能導致的不可預測的異常表型

  • 可進行超大片段(20-30kb)定點整合

  • 除Rosa26位點以外,另有多個位點可供選用,滿足不同研究需求

  • 可用於基因功能、蛋白功能的過表達研究

  • 可用於KO表型的Rescue實驗

  • 可用於在沒有人同源基因的情況下的人源基因表達模型

  • 可用於人類疾病基因突變


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隨機整合轉基因

利用高效PB轉座子系統,更高效地獲得轉基因小鼠模型。將目的片段克隆至PiggyBAC轉座子質粒中,與轉座酶一起注射到小鼠受精卵中;在轉座酶作用下,目的片段會被整合到基因組上的TTAA位點處,獲得轉基因小鼠。由於piggyBac轉座子在轉座酶的輔助下特異性識別基因組中5』-TTAA-3』位點,精確地剪切和插入不留下印跡,並且在隨機插入基因組的過程中,更傾向於插入有活躍轉錄的位置,故而能夠大幅提高轉基因小鼠外源基因的表達陽性率。

  • 快速高效獲得轉基因首建鼠Founder

  • 可利用熒光素酶報告基因,通過活體成像系統快速判斷Founder鼠目的基因表達

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